綠色熒光蛋白激發觀察方法

隨著時代科技發展進步，觀察熒光蛋白的技術也越來越便捷，傳統的熒光顯微鏡觀測熒光蛋白有很多局限性，2021年美國路陽生產的便攜式熒光蛋白激發觀測燈給轉基因研究工作者帶來了便捷性，無需取樣，打開觀測燈直接照射熒光蛋白，肉眼就能清晰看到熒光蛋白在葉片、愈傷、種子、菌落等載體上的表達。無論是綠色熒光蛋白、黃色熒光蛋白或紅色熒光蛋白，一臺觀測燈就能直接觀測2種熒光蛋白的表達。現上海峰志儀器有限公司技術工程師針對綠色熒光蛋白的觀測原理、幾種觀測方法介紹如下：

綠色熒光蛋白(GFP)：

綠色熒光蛋白(GFP)，是一個由約238個氨基酸組成的蛋白質，從藍光到紫外線都能使其激發，發出綠色螢光，在細胞生物學與分子生物學中，綠色螢光蛋白(GFP)基因常用做報告基因。綠色螢光蛋白基因也可以克隆到脊椎動物(例如:兔子)上進行表現，并拿來映證某種假設的實驗方法。通過基因工程技術，綠色螢光蛋白(GFP)基因能轉進不同物種的基因組，在后代中持續表達。現在，綠色螢光蛋白(GFP)基因已被導入并表達在許多物種，包括細菌，酵母和其他真菌，魚（例如斑馬魚），植物，蒼蠅，甚至人等哺乳動物的細胞。

GFP吸收的光譜峰值為395nm（紫外），并有一個峰值為470nm的副吸收峰（藍光）；發射光譜峰值為509nm（綠光），并帶有峰值為540nm的側峰。雖然450～490nm只是GFP的副吸收峰，但由于該激發光對細胞的傷害小，因此通常多使用該波段光源（多為488nm）。GFP熒光極其穩定，在激發光照射下，GFP抗光漂白能力比熒光素強，特別是在450～490nm藍光波長下穩定。類似的，GFP融合蛋白的熒光靈敏度遠比熒光素標記的熒光抗體高，抗光漂白能力強，因此適用于定量測定與分析。由于GFP熒光的產生不需要任何外源反應底物，因此GFP作為一種廣泛應用的活體報告蛋白，其作用是任何其它酶類報告蛋白無法比擬的。但因為GFP不是酶，熒光信號沒有酶學放大效果，因此GFP靈敏度可能低于某些酶類報告蛋白，比如螢火蟲熒光素酶等。

由于熒光蛋白能穩定在后代遺傳，并且能根據啟動子特異性地表達，在需要定量或其他實驗中慢慢取代了傳統的化學染料。更多地，熒光蛋白被改造成了不同的新工具，既提供了解決問題的新思路，也可能帶來更多有價值的新問題。

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上圖：熒光蛋白激發觀測燈照射植物根系，GFP熒光蛋白在根系上的表達

綠色熒光蛋白的激發觀察方法

1. 紫外光源
采用LUYOR-3410UV便攜式紫外光源（又叫高強度紫外線燈、黑光燈）觀察也非常方便，但如果觀察植物，植物葉片的葉綠色在紫外線燈下也會發出熒光，對gfp發出的熒光也會產生干擾，另外，標本長時間在紫外光源照射下對GFP標本組織也會造成破壞。

2. 便攜式GFP激發光源
采用LUYOR-3415RG便攜式GFP激發光源(又叫熒光蛋白觀測鏡、熒光蛋白激發觀測燈）是便捷、方便的觀察方法，因GFP在470nm有一個很高的吸收峰，采用 470nm激發光源能夠激發GFP發出明亮的綠色熒光，在觀察gfp熒光時，因為激發光為強烈的藍色光線，佩戴專業的觀察眼鏡才能觀察到清晰的熒光信號。

上圖：熒光蛋白激發觀測燈照射斑馬魚，紅色熒光蛋白在斑馬魚上的表達

3、熒光顯微鏡
熒光顯微鏡： 熒光顯微鏡是以紫外線為光源， 用以照射被檢物體，使之發出熒光，然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。熒光顯微鏡用于研究細胞內物質的吸收、運輸、化學物質的分布及定位等。 細胞中有些物質，如葉綠素等，受紫外線照射后可發熒光；另有一些物質本身雖不能發熒光，但如果用熒光染料或熒光抗體染色后，經紫外線照射亦可發熒光，熒光顯微鏡就是對這類物質進行定性和定量研究的工具之一。目前在常用的方法就是采用熒光顯微鏡觀察，熒光顯微鏡在實驗室普及。
但熒光顯微鏡zui大的缺點是需要取樣才能觀察，如果樣本過大，無法放置在熒光顯微鏡上面，需要破壞樣本進行取樣。 觀察植物葉片需要摘取葉片才能觀察。有時候觀察組培苗，組培苗在組培瓶里面無法取出，就無法在熒光顯微鏡下觀察，熒光顯微鏡在觀察熒光時候還是有很多的局限性。

總之，如果要激發熒光蛋白的熒光，觀測熒光蛋白的表達效果，LUYOR-3415RG便攜式熒光蛋白激發觀測燈是相對理想的觀測工具，上海峰志儀器有限公司銷售的LUYOR-3415RG便攜式熒光蛋白激發觀測燈檢測轉綠色熒光蛋白（GFP）基因、紅色熒光蛋白（DsRed）；檢測基因植物：水稻、小麥、玉米、大豆、棉花、擬南芥；檢測轉GFP、DsRed基因動物：小鼠、兔子、猴子等；檢測轉GFP、DsRed基因微生物：細菌、真菌、酵母等檢測GFP、DsRed基因組織特異性表達。上海峰 志儀器為美國路陽授權代理商，現貨供應美國路陽的LUYOR-3415RG便攜式熒光蛋白激發觀測燈。

上海峰志儀器有限公司代理銷售各種生命科學實驗室用實驗儀器，主要有紫外透射儀、紫外交聯儀、分子雜交箱、實驗室大面積紫外線燈、便攜式高強度紫外線燈、便攜式熒光蛋白觀測燈、超凈工作臺、LED光化學反應儀、生物毒性照射儀等，上海峰志為國外多家生命科學儀器公司授權代理商。